生鲜配送的最佳配送路线可以通过以下步骤确定：
数据收集：首先收集各个配送点的地址、配送量、配送时间窗口等数据，同时获取交通状况、道路限行信息等外部数据。
确定目标：确定优化的目标，比如最短路径、最少车辆、最少里程等，根据实际情况选择合适的目标。
路线规划：利用路线规划算法，比如Dijkstra算法、A*算法、遗传算法等，结合实际数据计算出最佳的配送路线。
考虑约束条件：考虑实际情况中的各种约束条件，比如时间窗口、车辆容量、道路限行等，确保生成的路线是可行的。
优化调整：根据实际情况对生成的路线进行优化调整，比如调整配送顺序、调整配送点分配等，以进一步提高效率。
实施监控：路线确定后，需要建立监控机制，实时监控配送进度、车辆位置等情况，及时调整以应对突发情况。
在实际案例中，可以借助地图软件和专业的配送管理系统，如美团、饿了么等平台所使用的配送系统，来帮助确定最佳配送路线。通过系统的数据分析和算法优化，可以提高配送效率，降低成本，提升用户满意度。